Behalve de nieuwe historische setting is er ook een totaal nieuwe hoofdpersoon. Het is de jonge edelman Ezio Auditore da Firenze, een verre nakomeling van Altaïr, de heldhaftige sluipmoordenaar uit het eerste spel. Ook Ezio heeft het bloed van een koelbloedige sluipmoordenaar in zijn aderen stromen. Dat komt goed van pas wanneer hij de dood van zijn vader wil wreken…
Assassins Creed II behoudt de vertrouwde elementen uit zijn voorganger. Ook nu heb je weer totale bewegingsvrijheid in een prachtig vorm gegeven wereld waar sluipen, plannen en geduld even belangrijk zijn als vechten, springen, klauteren en vluchten. De eerste Assassins Creed was het eerste echte next gen-spel, maar het doel van de 300 man die aan dit vervolg werkten was om het origineel op alle fronten te overtreffen.