Het spel is uitgerust met nieuwe levels en spectaculaire graphics, terwijl de gameplay nieuwe diepte krijgt door optimaal gebruik van wondermooie 3D-omgevingen. Spelers volgen met Donkey Kong en Diddy Kong een spoor van bananen door jungles, strandgebieden en tempelruïnes om de dierbare bananenvoorraad van Donkey Kong te redden van zijn vele beestachtige vijanden.
Kanontonnen, mijnwagentjes en andere populaire elementen uit de originele serie zijn terug voor een heerlijk nostalgisch gevoel. Ook staan spelers vele nieuwe elementen en verrassingen te wachten. De grootste vernieuwing is namelijk de mogelijkheid om het hele avontuur met twee spelers samenwerkend te beleven. Diddy Kong kan wanneer hij wil op en van de rug van Donkey Kong springen, waardoor twee spelers niet alleen los van elkaar maar ook als eenheid kunnen spelen.